lآب مورد استفاده در محيط سازي بايد داراي كيفيت مناسب باشد يعني فاقد مواد مهار كنندة رشد ميكروبي (يونهاي سمي مثل مس) يا تأثيرگذار در رشد ميكروبي باشد. آب شير نامناسب است چون داراي ناخالصي هاي ذاتي(منيزيم، كلسيم، كلر، فلور) است.
 
lآب خوب و تازه را با تقطير يا ديونيزاسيون تهيه كنيد. براي نگهداري آبمقطر از ظرفي استفاده كنيد كه از مواد خنثي (شيشة خنثي، پلي اتيلن) تهيه شده باشد.
lضريب هدايت آب بايد كمتر از   15 µsباشد.
l  PHآب معمولاً كنترل نمي شود مگر آنكه در PH محيط هاي كشت تهيه شده، مشكلي بوجود آيد.
 
lدر تهية محيط كشت طبق دستورالعمل شركت سازنده كه بر روي قوطي نصب شده، مقدار مناسبي از پودر را با دقت وزن كنيد.
lظرف محيط كشت را دور از كوران هوا و رطوبت باز كنيد.
lاز استنشاق پودرها بخصوص آنهايي كه داراي مواد سمي هستند و تماس طولاني مدت آنها با پوست اجتناب كنيد.
lپودر را به سرعت، به دقت و بدون ايجاد توده اي از غبار وزن كنيد. هنگام كار از ماسك مناسب استفاده كنيد.
lدرب قوطي محيط كشت را هر چه سريعتر ببنديد.
 
lنصف حجم آب مورد نياز را داخل ظرف بريزيد، سپس مقدار توزين شدة محيط كشت را به آن اضافه نماييد و براي چند دقيقه به تندي تكان دهيد.
lباقيماندة آب را به ديواره هاي ظرف بريزيد تا ذرات محيط كشت چسبيده به ديوار، وارد محلول شوند. اين مرحله بسيار مهم است چون ممكن است پودر خشك محيط كشت در بالاي سطح آب در اتوكلاو استريل نشود و منبع آلودگي بعدي گردد.
lآب را در ظرف مناسب، با حجم 2 تا 3 برابر حجم نهايي محيط كشت بريزيد تا بتوان آنرا بخوبي تكان داد و مخلوط نمود.
 
lمحيط هاي كشت فاقد آگار معمولا به راحتي در آب حل ميشوند.
lمحيط هاي كشت حاوي آگار را بايد قبل از حرارت دادن، چند دقيقه با آب مخلوط نمود، سپس حرارت داد تا آگار قبل از اتوكلاو كردن كاملاً حل شود. محيط هاي كشت را بجوشانيد بدون آنكه بسوزند.
lمحيط هاي كشتي كه نبايد اتوكلاو شوند بعد از حل شدن آگار، براي توزيع در ظروف نهايي آماده خواهند بود اما اكثر محيطهاي كشت به استريليزاسيون نهايي دارند.
 
qاستريليزاسيون با حرارت مرطوب:
 در اتوكلاو به مدت 15 دقيقه و در دمايC   ۫121 انجام مي گيرد.
 توصيه مي شود مقادير زياد محيط كشت را در حجم هاي كوچكترتقسيم نماييد.
qاستريليزاسيون با صافي غشايي:

     استريليزاسيون تحت شرايط خلأ يا افزايش فشار انجام مي گيرد.

     براي استريليزاسيون مواد و تركيبات حساس به حرارت بكار ميرود.

     از غشاءها و صافي هاي با قطر منفذ µm 22/0 يا 45/0 استفاده كنيد.

     اين فيلترها قبل از استفاده بايد در اتوكلاو استريل شوند.

 

 
lاگر محيط هاي كشت دهيدراته بطور مناسب تهيه شوند، نيازي به تنظيم  PHتوسط مصرف كننده نيست.
lPH نهايي محصول استريل شده را مي توان روي پليت يا بطري اندازه گيري كرد، اما بايد آن را پس از سنجش PH دور ريخت.
lپس از استريل و خنك شدن محيط كشت تا دماي C ۫ 25، مقدار PH را در حد مورد نظر( 2/0 ±) تنظيم كنيد.
lتنظيم PH معمولاً با استفاده از NaOH40 گرم در ليتر و يا با استفاده از HCl 5/36 گرم در ليتر انجام مي شود.
 
lبعد از استريليزاسيون و پس از آنكه دماي محيط كشت به حدود C ۫ 50  رسيد، با رعايت شرايط آسپتيك آنرا در ظروف نهايي استريل توزيع كنيد.
lبايد مكمل هاي حساس به حرارت را بعد از آنكه دماي محيط كشت به حدود C ۫ 50  رسيد،  در شرايط آسپتيك به آن اضافه نمود.
lدماي مكمل (ساپلمنت) استريل  نيز بايد قبل از افزودن به محيط كشت به دماي اتاق برسد.
lجهت كنترل استريل بودن پليتها، 5-3% آنها را براي 24 ساعت انكوبه كنيد. در طول انكوباسيون ممكن است رطوبت محيط آگار از بين برود.   از دست دادن بيش از 15% محتويات آب، ممكن است روي رشد ميكروارگانيسم اثر نامطلوب بگذارد.
 
lمحيط هاي كشت آماده شده را سريعاً مصرف نموده يا تحت شرايطي كه محتوياتشان تغيير نكند يعني دور از نور و در دماي يخچال ذخيره نماييد.
lدر صورت بسته بندي پليتها در كيسه هاي پلاستيكي، زمان نگهداري آنها افزايش مي يابد. براي جلوگيري از تجمع رطوبت در پليتها، آنها را قبل از قرار دادن در كيسه، خنك كنيد.
lبراي تلقيح سطحي محيط كشت جامد، سطح پليت مربوطه را خشك كنيد. براي اين كار، درپوش پليت را برداشته و هر دو را بطور واژگون در داخل انكوباتور كه در دماي C ۫ 50 – 25 تنظيم شده، قرار دهيد تا قطرات آب از سطح محيط كشت ناپديد شود.